CULTIVO DE HONGOS

 

Introducción

 

La rama de la microbiología que estudia los hongos (reino Fungi) se conoce como la micología.  Los hongos se clasifican en 4 grupos principales a base de su modo de reproducción sexual:

 

1.                  Phycomycetes: mohos (“molds”) del agua, del pan y trerrestres. Las

                       esporas reproductivas son externas y descubiertas.

 

 

2.                  Ascomycetes: levaduras (“yeast”) y mohos.  Poseen esporas sexuales

                        llamadas ascoesporas.  Estas se producen en sacos llamados ascos.

 

3.                  Basidiomycetes: setas. Forman esporas reproductivas conocidas como 

                        basidioesporas en estructuras llamadas basidios.

 

4.                  Deuteromycetes: También llamados hongos imperfectos porque no tienen 

                        fase reproductive sexual.

 

Los hongos son organismos heterotróficos, eucariotas capaces de metabolizar gran variedad de sustratos orgánicos. Los hongos pueden ser de gran beneficio así como también perjudiciales al ser humano.  Aquellos que habitan en el suelo ayudan a descomponer plantas y animales muertos, manteniendo fértil el terreno.  Los hongos que llevan a cabo fermentación son de gran importancia industrial.  La industria de la cerveza, el vino, los quesos, los antibióticos, las enzimas, la repostería, dependen de los hongos.  Algunas actividades detrimentales de los hongos son por ejemplo: el moho que le dá a las frutas , vegetales y granos, el daño a los alimentos en general.  Algunas especies son capaces de producir drogas como toxinas y halucinógenos.  Algunas especies pueden causar enfermedades al hombre, ejemplo de éstos son las micosis superficiales (en piel, pelo y uñas) y las micosis sistémicas (en pulmones, sistema nervioso, genitales).

 

 La asociación entre la densidad de hongos y las descargas orgánicas a cuerpos de agua o en el suelo, sugieren que los hongos pueden ser indicadores de contaminación. Desafortunadamente no se han identificado especies o grupos de hongos importantes en este rol.  Algunas especies de levaduras y hongos filamentosos son característicos de aguas calientes y pueden ser indicadores útiles de contaminación termal.

 

La identificación de hongos es dependiente de la morfología (forma) de las colonias cuando se crecen en medio sólido, así como su crecimiento y morfología de estructuras reproductivas.  Para la identificación de las levaduras es importante la actividad fisiológica en cultivos en el laboratorio.

 

 

Método:

 

Muestras:

 

1.                  Envases: las muestras de agua o suelo se debe coleccionar en envases

                        estérilizados con tapas. El transporte de los envases debe ser de forma 

                        derecha y deben descartarse luego de su uso. 

2.                  Almacenamiento:  las muestras deben ser procesadas no más tarde de 24

                        horas de se recolección el campo.  Si el análisis no se comienza 

                        prontamente, se deberán refrigerar.

 

 

 

Medios de Cultivo:

 

Es donde se ponen a crecer los hongos.  Se pueden usa los siguientes medios:

 

Agar Sabouraud

Agar Neopeptone-glucose-rose Bengal-aureomycin

Agar Czapek  (para Aspergillus, penicillium y hongos relacionedos

Agar Yeast extract-malt extract-glucose 

Agar Diamalt  (para levaduras)

 

 

Preparación y diluciones:

 

Una vez recolectada las muestras en el campo se deben hacer diluciones de las mismas antes de sembrar en placas.  Cuando se procesan muestras de agua de quebradas se deberá hacer diluciones de 1/10 de la muestra original. Para muestras de agua con gran material orgánico se deberán hacer diluciones de 1/100 o 1/1,000.  Para muestras de suelo, utilizar diluciones de 1/1,000 o 1/10,000.

 

Para realizar diluciones de las muestras se deberá usar agua esteril y toda la cristalería también esteriles.

 

Cultivo en placas:

 

Preparar  placas para cada dilución  a ser examinada.  Transferir 10 ml de medio a 45 0C a placas petri de 9 cm.  Añadir 1 ml de la muestra diluída y mezclar mediante rotación de la placa. 

Solidificar el agar lo más rápido possible.   Tapar de inmediato las placas para evitar contaminación.

 

Incubación:

 

Incubar las placas sin invertirlas a temperatura de salón (20-240C) en luz, pero evitar que sea directa.  Examinar y contar las colonias en las placas luego de 3, 5 y 7 días.

 

Conteo e inventario:

 

El conteo de hongos en una placa proveerá la base para comparaciones cuantitativas entre muestras tomadas en distintas localidades. El inventario nos hablará de  la abundancia de especies de hongos en la zona.  Descartar placas con más de 300 colonias.

Se puede calcular el número de hongos por volúmen de agua en las muestras y así comparar varios sitios muestreados.

 

# de hongos/ ml de  muestra   =  suma del número de colonias en las 5 placas X dilución de una misma dilución

 

Para realizar un inventario se deberá utilizar el microscopio para ver morfología y estructuras reproductivas que ayuden en la clasificación de las especies.  

 

Referencias:

 

Laboratory Exercices in Microbiology, R. A. Pollack. 2002 John Wiley & sons,

Inc

 

J.G. y N. Sherman.1992.  Microbiology a Laboratory Manual 3ra edición

Cappuccino Benjamin/Cummings Inc.

 

A.E. Greenberg, L.S. Clesceri y A. D. Eaton 1992.

Standard Methods for Examination of Water and Wastewater 18th edición