Tinción de Gram.

 

Esta tinción nos permite diferenciar entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.  La diferencia entre estos microorganismos estriba en el tipo de pared celular que posee la bacteria.

 

 

Materiales:

 

  1. Buscar los agentes y materiales de laboratorio para realizar este ejercicio:

Materiales:

    1. Mechero
    2. Asa
    3. Desinfectante
    4. Microscopio. Laminilla y cubre-objeto
    5. Bandeja para hacer tinción.

      Agentes:

1.      Tinte cristal violet

2.      Iodo. Grams iodine

3.      Alcohol o descolorizante.

4.      Safranina

5.      Agua

Procedimiento:

  1. Limpia bien la laminilla con agua y jabón. Puedes utilizar unas pinzas para calentar la laminilla en el mechero.
  2. Desinfecta el asa ( aguja de inocular) en el mechero. Obtén el cultivo con los microorganismos:  estos pueden estar en caldo (tubo con líquido) o pueden estar sembrados en agar nutriente (placa Petri con medio que se ve sólido).  Con el asa (desinfectada) obtén una gota de estos (si los mismos estan en un caldo nutriente) o puedes obtener con la aguja de inocular en punta una pequena muestra del cultivo si estan en agar.  Transfiere a la laminilla limpia la muestra del cultivo. Desinfecta el asa nuevamente.

OJO: Si las bacterias entan en agar deberás hechar un gota de agua estéril a la laminilla antes de transferir las bacterias del agar a la laminilla.

Paasr la laminilla por la flama varias veces muy rápido y esperar que la muestra se seque.

  1. Obtener el cristal violet  y añadir una gota a la laminilla, sobre los microorganismos. Espera   por un minuto a que seque un poco el tinte.
  2. Lava la laminilla con agua. Espera que se seque.
  3. Obtener el tinte Grams iodine y colocar una gota sobre la laminilla, sobre los microorganismos. Espera   por un minuto a que seque un poco el tinte.
  4.  Lava la laminilla con agua. Espera que se seque.
  5. Obtener el Alcohol o descolorizante y colocar una gota sobre la laminilla, sobre los microorganismos. Espera   por un minuto a que seque un poco.
  6. Lava la laminilla con agua. Espera que se seque.
  7. Obtener la safranina y colocar una gota sobre la laminilla, sobre los microorganismos. Espera   por un minuto a que seque un poco.
  8.  Lavar con agua y esperar que seque. La laminilla esta lista para observarse por microscopio.